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Sprache(n):
deu - German
Datum:
2008-08-19
Publikationsstatus:
Angenommen
Seiten:
35
Ort, Verlag, Ausgabe:
Potsdam : Universität Potsdam
Inhaltsverzeichnis:
1 Zusammenfassung 1
2 Einleitung 2
2.1 DNAzyme . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
2.2 Rolling circle ampli cation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
2.3 Zielstellung der Arbeit . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
3 Materialien und Methoden 6
3.1 Materialien . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6
3.1.1 Oligonukleotide . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6
3.1.2 Pu er . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
3.2 Methoden . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
3.2.1 Ausbildung der DNAzyme . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
3.2.2 Luminometrische Messung . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
3.2.3 Photometrische Messung . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
3.2.4 Standardisierung der Messsignale . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
3.2.5 Untersuchung der Heminbindung . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
3.2.6 Herstellung der RCA-Matrize . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
3.2.7 RCA in Lösung . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
3.2.8 Ober ächenbehandlungen . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
3.2.9 Immobilisierung der DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
3.2.10 Konformation und Messung an der Ober äche . . . . . . . . . . . . . . . . 12
4 Ergebnisse 13
4.1 DNAzyme in Lösung . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
4.1.1 Standardisierung der Daten . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
4.1.2 Optimierung der Messpu er . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
4.1.3 Untersuchung des Hintergrundsignals . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14
4.1.4 Heminbindung . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14
4.1.5 Untersuchung der Konformation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15
4.1.6 Untersuchung der Sensitivität . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
4.1.7 Optimierung des Abstands zwischen benachbarten DNAzymen . . . . . . 17
4.2 RCA in Lösung . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 17
4.2.1 Kontrollen der RCA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 17
4.2.2 Optimierung der RCA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
4.3 Immobilisierte DNAzyme . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
4.4 RCA-Assay an der Ober äche . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22
5 Diskussion 23
5.1 Ausleseprinzipien . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23
5.2 Eigenschaften des verwendeten DNAzyms . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23
5.3 RCA in Lösung . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
5.4 Ober ächenkopplung . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25
5.5 DNAzym-Aktivität an der Ober äche . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25
5.6 RCA-Assay an der Ober äche . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26
5.7 Ausblick . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26
Literaturverzeichnis 27
Art der Begutachtung:
-
Identifikatoren:
eDoc: 444392
Art des Abschluß:
Bachelor