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Abstract:
In dieser Arbeit wurde sensorisches Rhodopsin II (SRII) und der Photorezeptorkomplex, SRII mit seinem Transducer HtrII in Lipid Nanodisks eingelagert. Nanodisks bestehen aus einer Phospholipid Doppelschicht die von einem Proteinmantel umrandet wird und bilden eine wasserlösliche Modelmembran. Verschiedene biochemische Parameter wurden optimiert um einen möglichst effizienten Einbau der Membranproteine und anschließender Aufreinigung der Disks, zu erreichen. Der Einbau der relevanten Trimer von Dimer Stöchiometrie des SRII/HtrII Photorezeptorkomplex konnte deutlich im Elektronenmikroskop sichtbar gemacht werden. Außerdem wurde durch Messung der Kinetik des Photozyklus des SRII sowie des Komplexes in Nanodisks die Aktivität der Membranproteine nachgewiesen.
Abstract:
In this work, sensory rhodopsin II (SRII) and the photoreceptor complex, SRII with its transducer HtrII were incorporated into lipid nanodiscs. Nanodiscs consist of a phospholipid bilayer surrounded by a protein shell and form a water-soluble model membrane. Various biochemical parameters were optimized to achieve the most efficient membrane protein reconstitution and subsequent purification of the discs. The incorporation of the relevant trimers of dimers stoichiometry of the SRII/HtrII photoreceptor complex was clearly visualized by electron microscopy. Furthermore, the protein activity was determined by measurements of SRII photocycle in nanodiscs.
