Interrogating surface versus intracellular transmembrane receptor populations 
using cell-impermeable SNAP-tag substrates

Poc, Pascal; Gutzeit, Vanessa A.; Ast, Julia; Lee, Joon; Jones, Ben J.; D´Este, Elisa; Mathes, Bettina; Hodson, David J.; Levitz, Joshua; Broichhagen, Johannes

doi:10.1101/2020.01.29.924829

Interrogating surface versus intracellular transmembrane receptor populations using cell-impermeable SNAP-tag substrates

Poc, P., Gutzeit, V. A., Ast, J., Lee, J., Jones, B. J., D´Este, E., Mathes, B., Hodson, D. J., Levitz, J., & Broichhagen, J. (2020). Interrogating surface versus intracellular transmembrane receptor populations using cell-impermeable SNAP-tag substrates. Chemical Science, 2020(30), 7871-7883. doi:10.1101/2020.01.29.924829.

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資料種別: 学術論文

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Poc, Pascal¹, 著者
Gutzeit, Vanessa A., 著者
Ast, Julia, 著者
Lee, Joon, 著者
Jones, Ben J., 著者
D´Este, Elisa², 著者
Mathes, Bettina¹, 著者
Hodson, David J., 著者
Levitz, Joshua, 著者
Broichhagen, Johannes³, 著者

所属:
1Max Planck Institute for Medical Research, Max Planck Society, ou_1125545
2Department of NanoBiophotonics, MPI for Biophysical Chemistry, Max Planck Society, ou_578627
3Chemical Biology, Max Planck Institute for Medical Research, Max Planck Society, ou_2364732

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キーワード: -

要旨: Employing self-labelling protein tags for the attachment of fluorescent dyes has become a routine and powerful technique in optical microscopy to visualize and track fused proteins. However, membrane permeability of the dyes and the associated background signals can interfere with the analysis of extracellular labeling sites. Here we describe a novel approach to improve extracellular labeling by functionalizing the SNAP-tag substrate benzyl guanine (“BG”) with a charged sulfonate (“SBG”). This chemical manipulation improves solubility, reduces non-specific staining and renders the bioconjugation handle impermeable while leaving its cargo untouched. We report SBG-conjugated fluorophores across the visible spectrum, which cleanly label SNAP-fused proteins in the plasma membrane of living cells. We demonstrate the utility of SBG-conjugated fluorophores to interrogate class A, B and C G protein-coupled receptors (GPCRs) using a range of imaging approaches including nanoscopic super-resolution imaging, analysis of GPCR trafficking from intra- and extracellular pools, in vivo labelling in mouse brain and analysis of receptor stoichiometry using single molecule pull down.

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言語: eng - English

日付: 投稿: 2020-05-15受理: 2020-07-02オンライン出版: 2020-01-30出版: 2020-08-14

出版の状態: 出版

ページ: 13

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目次: -

査読: 査読あり

識別子（DOI, ISBNなど）: DOI: 10.1101/2020.01.29.924829
URI: https://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2020/SC/D0SC02794D#!divAbstract

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出版物名: Chemical Science

その他 : Chem. Sci.

種別: 学術雑誌

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出版社, 出版地: Cambridge, UK : Royal Society of Chemistry

ページ: - 巻号: 2020 (30) 通巻号: - 開始・終了ページ: 7871 - 7883 識別子（ISBN, ISSN, DOIなど）: ISSN: 2041-6520
CoNE: https://pure.mpg.de/cone/journals/resource/2041-6520

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