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  Reversible live-cell labeling with retro-engineered HaloTags enables long-term high- and super-resolution imaging

Holtmannspötter, M., Wienbeuker, E., Dellmann, T., Watrinet, I., Garcia-Sáez, A. J., Johnsson, K., Kurre, R., & Piehler, J. (2023). Reversible live-cell labeling with retro-engineered HaloTags enables long-term high- and super-resolution imaging. Angewandte Chemie International Edition, 62(18):, pp. 1-8. doi:10.1002/anie.202219050.

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資料種別: 学術論文

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作成者

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 作成者:
Holtmannspötter, Michael, 著者
Wienbeuker, Eike, 著者
Dellmann, Timo, 著者
Watrinet, Isabelle, 著者
Garcia-Sáez, Ana J, 著者
Johnsson, Kai1, 著者           
Kurre, Rainer, 著者
Piehler, Jacob, 著者
所属:
1Chemical Biology, Max Planck Institute for Medical Research, Max Planck Society, ou_2364732              

内容説明

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キーワード: Fluorescent Probes; Protein Engineering; STED Microscopy; Self-Labeling Enzyme; Single Molecule Tracking
 要旨: Self-labeling enzymes (SLE) such as the HaloTag have emerged as powerful tools in high and super-resolution fluorescence microscopy. Newly developed fluorogenic SLE substrates enable imaging in the presence of excess dye. To exploit this feature for reversible labeling, we engineered two variants of HaloTag7 with restored dehalogenase activity. Kinetic studies in vitro showed different turnover kinetics for reHaloTagS (≈0.006 s-1 ) and reHaloTagF (≈0.055 s-1 ). Imaging by confocal and stimulated emission depletion microscopy yielded 3-5-time enhanced photostability of reHaloTag labeling. Prominently, single molecule imaging with reHaloTags enabled controlled and stable labeling density over extended time periods. By combination with structured illumination, simultaneous visualization of single molecule diffusion and organellar dynamics was achieved. These applications highlight the potential of reHaloTag labeling for pushing the limits of advanced fluorescence microscopy techniques.

資料詳細

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言語: eng - English
 日付: 2022-12-232023-02-032023-02-032023-04-24
 出版の状態: 出版
 ページ: 8
 出版情報: -
 目次: -
 査読: 査読あり
 識別子（DOI, ISBNなど）: URI: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36735334/
DOI: 10.1002/anie.202219050
 学位: -

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出版物 1

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出版物名: Angewandte Chemie International Edition
  省略形 : Angew. Chem., Int. Ed.
種別: 学術雑誌
 著者・編者:
所属:
出版社, 出版地: Weinheim : Wiley-VCH
ページ: - 巻号: 62 (18) 通巻号: e202219050 開始・終了ページ: 1 - 8 識別子（ISBN, ISSN, DOIなど）: ISSN: 1433-7851
CoNE: https://pure.mpg.de/cone/journals/resource/1433-7851